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數(shù)字PCR儀實現(xiàn)了定量及稀有等位基因的檢測

更新時間:2021-04-07瀏覽:1551次
  數(shù)字PCR儀是一種核酸檢測和定量分析的新方法,可以作為傳統(tǒng)實時定量PCR的替代方法,以實現(xiàn)一致定量及稀有等位基因的檢測。數(shù)字PCR的工作原理在于將DNA或cDNA樣品分割為許多單獨、平行的PCR反應(yīng),部分這些反應(yīng)包含了靶標分子(陽性),而其他不包含(陰性)。單個分子可以被擴增一百萬倍或更多。在擴增期間,TaqMan化學(xué)試劑及染料標記探針可用于檢測特定序列的靶標。當不存在任何靶標序列時,沒有信號累積。PCR分析后,陰性反應(yīng)片段用于生成樣品中靶標分子的一致計數(shù),而無需標準品或內(nèi)標。
  納流芯片的使用提供了便捷和直觀的機制來同時平行運行上千個PCR反應(yīng)。每個孔都加入了樣品、擴增混合物和TaqMan測定試劑的混合物,然后進行單獨分析以檢測存在(陽性)或不存在(陰性)終點信號??紤]到孔可能接收到多個靶標序列分子,使用泊松模型應(yīng)用了一個校正因子。
  數(shù)字PCR儀和試劑能夠提高現(xiàn)有TaqMan測定的性能,從而實現(xiàn)更高的靈敏度、精度和一致定量,使應(yīng)用從中獲益。
  PCR就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內(nèi)InVitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復(fù)制。在使用PCR儀的過程中需要注意以下事項:
  1)環(huán)境要恒定,運作環(huán)境的溫度不能過高或過低,在用空調(diào)的房間使用,有些PCR儀有溫度保護程序,在過低的溫度下機器不能啟動。
  2)電源要穩(wěn)定,工作的電壓不能波動過大,波動過大會造成電子器件損壞,一般建議將PCR儀電源接于穩(wěn)壓電源上。
  3)盡量不要保存過夜,能經(jīng)常使用就不容易壞。
  4)數(shù)字PCR儀在使用前要詳細閱讀使用說明書,遇到不能解決的問題不要隨意拆卸儀表,打電話咨詢廠家或技術(shù)支持部門,通過指導(dǎo)進行維修。

聯(lián)系電話:
020-39921409

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